КЛИНИЧЕСКИЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАКА ТЕЛА МАТКИ
Во второй половине XX века произошло значительное учащение рака эндометрия в экономически развитых странах. За последние 15 лет в России заболеваемость раком тела матки увеличилась на 56,8 %. По сводным данным Международной ассоциации акушеров и гинекологов, 5-летней выживаемости при раке тела матки удается добиться только у 67,7 % больных, в то время как 22,4 % пациенток погибают в этот срок наблюдения от рецидивов и метастазов опухоли. Особую актуальность представляют исследования, посвященные изучению экспрессии белков – регуляторов клеточного цикла, апоптоза, пролиферации и ангиогененеза в малигнизированном эндометрии для понимания их роли в патогенезе рака эндометрия. На сегодняшний день литературные данные по изучению иммуногистохимических характеристик рака эндометрия немногочисленны и противоречивы.
Поэтому целью настоящего исследования явилось изучение экспрессии маркеров апоптоза, неоангиогенеза и р53 в опухолях эндометрия во взаимосвязи с клиническими проявлениями рака тела матки. В исследование вошла 31 пациентка пери- и постменопаузального периодов, страдающая раком тела матки. Изучалась экспрессия онкосупрессорного протеина р53, про- и антиапоптотических белков Bax и Bcl-2, а также рецепторов эстрогенов (ER) и прогестерона (PR). Проводилась оценка ангиогенеза в опухоли путем подсчета количества микрососудов, ок-
рашенных антителами к эндотелиальным клеткам (CD31). Иммуногистохимические исследования проводили пероксидазно-антипероксидазным методом по традиционной методике. Рецепторположительными считали опухоли, в которых выявлялось более 5–10 % четко окрашенных ядер. При постановке иммуногистохимической реакции с антителами к Bcl-2 и Bax цитоплазматическое и мембранное окрашивание 20 % и более опухолевых клеток принимали за положительную реакцию. Опухоли считали положительными по экспрессии р53 при окрашивании более 25 % опухолевых клеток. Оценка неоангиогенеза в опухолях проводилась путем подсчета количества микрососудов, окрашенных антителами CD31. В препаратах, окрашенных с помощью этого антитела, подсчитывали количество микрососудов в опухоли не менее чем в 10 полях зрения при х400. Количество сосудов в опухоли менее 10 принимали за низкую плотность микрососудов, 10 и более – относили к умеренной и высокой плотности сосудов в опухоли.
По результатам иммуногистохимического окрашивания срезов на протоонкоген Bcl-2 вся группа больных РЭ была разбита на 2 подгруппы: Bcl-2-позитивные опухоли (n=19), Bcl-2-негативные опухоли (n=12). Исследование показало, что в Bcl-2-позитивных и Bcl-2-негативных опухолях эндометрия примерно с одинаковой частотой выявлена умеренная и высокая экспрессия Bax, примерно в трети опухолей, как Bcl-2-позитивных, так и Bcl-2-негативных выявлен мутантный р53. В Bcl-2-позитивных опухолях преимущественно выявлялась высокоразвитая сеть кровеносных сосудов (более чем в 73 % случаев), в то
время как в Bcl-2- негативных опухолях эндометрия в основном выявлялась низкая плотность сосудов. Опухоли, экспрессировавшие Bcl-2, как правило, содержали PR-рецепторы в отличие от Bcl-2 негативных опухолей эндометрия. При корреляционном анализе были выявлены статистически значимые корреляционные взаимосвязи между экспрессией Bcl-2 и PR-
рецепторами (r=0,462, p=0,009), экспрессий Bcl-2 и значением плотности микрососудов в опухоли (r=0,477, p=0,007), экспрессий Bax и возрастом больных (r=0,580, p=0,038).
Полученные данные свидетельствуют об определенной дифференциации злокачественных новообразований эндометрия в зависимости от уровня экспрессии Bcl-2. Анализируя выраженность неоангиогенеза и активность ферментов синтеза и метаболизма эстрогенов в опухолях, можно отметить, что, повидимому, Bcl-2-позитивные опухоли являются более
агрессивными по своему биологическому потенциалу, поскольку в этих опухолях наряду с высоким уровнем синтеза эстрогенов выявлялся также высокий уровень неоангиогенеза, причем в подавляющем большинстве эти опухоли несли PR. Необходимо отметить, что согласно современной модели регуляции апоптоза, отношение уровня экспрессии белков семейства Bcl агонистов (Bax и др.) и антагонистов (Bcl-2) апоптоза, важный, но не единственный момент, определяющий развитие апоптоза клеток. Анализ литературы по апоптозу при РЭ показал, что хорошо изучены лишь отдельные звенья как рецепторлиганд опосредованного, так и митохондриального механизмов апоптоза. Полученные данные свидетельствуют, что неоангиогенез и апоптоз в опухолях эндометрия тесно связаны с наличием ER и PR в опухоли.
В опухолях, экспрессирующих Bcl-2, как правило, выявлялась умеренная или высокая плотность микрососудов, что, по данным ряда авторов, ассоциируется с худшим прогнозом для пациентов. Анализируя полученные данные, можно отметить, что, по-видимому, Bcl-2-позитивные опухоли являются более агрессивными по своему биологическому потенциалу, поскольку в этих опухолях выявлялся высокий уровень маркера неоангиогенеза, причем в подавляющем большинстве эти опухоли несли PR. Вcl-2-позитивные опухоли в основном несли PR, однако в отношении ER картина была мозаичной и большинство опухолей не экспрессировали ER. Отсутствие ER в эндометриоидной аденокарциноме тела матки сопровождается нарастанием рецидивов с 12,7 % до 29 % и в целом связано с более неблагоприятным прогнозом. Таким образом, совокупность полученных результатов и данных литературы позволяет предположить более неблагоприятный прогноз у группы боль-
ных с экспрессией Bcl-2, умеренной и высокой плотностью микрососудов в опухоли, отсутствием ER.
Полученные результаты являются основой для дальнейших исследований, посвященных индивидуальному прогнозированию течения РЭ и выделению групп больных с неблагоприятным прогнозом, где наряду с клиническими параметрами: стадией про-
цесса и гистотипом опухоли должен определяться комплекс иммуногистохимических маркеров.
Т.А. Айвазян, Л.А. Александрова, И.М. Нестеров ГУ «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова»
Во второй половине XX века произошло значительное учащение рака эндометрия в экономически развитых странах. За последние 15 лет в России заболеваемость раком тела матки увеличилась на 56,8 %. По сводным данным Международной ассоциации акушеров и гинекологов, 5-летней выживаемости при раке тела матки удается добиться только у 67,7 % больных, в то время как 22,4 % пациенток погибают в этот срок наблюдения от рецидивов и метастазов опухоли. Особую актуальность представляют исследования, посвященные изучению экспрессии белков – регуляторов клеточного цикла, апоптоза, пролиферации и ангиогененеза в малигнизированном эндометрии для понимания их роли в патогенезе рака эндометрия. На сегодняшний день литературные данные по изучению иммуногистохимических характеристик рака эндометрия немногочисленны и противоречивы.
Поэтому целью настоящего исследования явилось изучение экспрессии маркеров апоптоза, неоангиогенеза и р53 в опухолях эндометрия во взаимосвязи с клиническими проявлениями рака тела матки. В исследование вошла 31 пациентка пери- и постменопаузального периодов, страдающая раком тела матки. Изучалась экспрессия онкосупрессорного протеина р53, про- и антиапоптотических белков Bax и Bcl-2, а также рецепторов эстрогенов (ER) и прогестерона (PR). Проводилась оценка ангиогенеза в опухоли путем подсчета количества микрососудов, ок-
рашенных антителами к эндотелиальным клеткам (CD31). Иммуногистохимические исследования проводили пероксидазно-антипероксидазным методом по традиционной методике. Рецепторположительными считали опухоли, в которых выявлялось более 5–10 % четко окрашенных ядер. При постановке иммуногистохимической реакции с антителами к Bcl-2 и Bax цитоплазматическое и мембранное окрашивание 20 % и более опухолевых клеток принимали за положительную реакцию. Опухоли считали положительными по экспрессии р53 при окрашивании более 25 % опухолевых клеток. Оценка неоангиогенеза в опухолях проводилась путем подсчета количества микрососудов, окрашенных антителами CD31. В препаратах, окрашенных с помощью этого антитела, подсчитывали количество микрососудов в опухоли не менее чем в 10 полях зрения при х400. Количество сосудов в опухоли менее 10 принимали за низкую плотность микрососудов, 10 и более – относили к умеренной и высокой плотности сосудов в опухоли.
По результатам иммуногистохимического окрашивания срезов на протоонкоген Bcl-2 вся группа больных РЭ была разбита на 2 подгруппы: Bcl-2-позитивные опухоли (n=19), Bcl-2-негативные опухоли (n=12). Исследование показало, что в Bcl-2-позитивных и Bcl-2-негативных опухолях эндометрия примерно с одинаковой частотой выявлена умеренная и высокая экспрессия Bax, примерно в трети опухолей, как Bcl-2-позитивных, так и Bcl-2-негативных выявлен мутантный р53. В Bcl-2-позитивных опухолях преимущественно выявлялась высокоразвитая сеть кровеносных сосудов (более чем в 73 % случаев), в то
время как в Bcl-2- негативных опухолях эндометрия в основном выявлялась низкая плотность сосудов. Опухоли, экспрессировавшие Bcl-2, как правило, содержали PR-рецепторы в отличие от Bcl-2 негативных опухолей эндометрия. При корреляционном анализе были выявлены статистически значимые корреляционные взаимосвязи между экспрессией Bcl-2 и PR-
рецепторами (r=0,462, p=0,009), экспрессий Bcl-2 и значением плотности микрососудов в опухоли (r=0,477, p=0,007), экспрессий Bax и возрастом больных (r=0,580, p=0,038).
Полученные данные свидетельствуют об определенной дифференциации злокачественных новообразований эндометрия в зависимости от уровня экспрессии Bcl-2. Анализируя выраженность неоангиогенеза и активность ферментов синтеза и метаболизма эстрогенов в опухолях, можно отметить, что, повидимому, Bcl-2-позитивные опухоли являются более
агрессивными по своему биологическому потенциалу, поскольку в этих опухолях наряду с высоким уровнем синтеза эстрогенов выявлялся также высокий уровень неоангиогенеза, причем в подавляющем большинстве эти опухоли несли PR. Необходимо отметить, что согласно современной модели регуляции апоптоза, отношение уровня экспрессии белков семейства Bcl агонистов (Bax и др.) и антагонистов (Bcl-2) апоптоза, важный, но не единственный момент, определяющий развитие апоптоза клеток. Анализ литературы по апоптозу при РЭ показал, что хорошо изучены лишь отдельные звенья как рецепторлиганд опосредованного, так и митохондриального механизмов апоптоза. Полученные данные свидетельствуют, что неоангиогенез и апоптоз в опухолях эндометрия тесно связаны с наличием ER и PR в опухоли.
В опухолях, экспрессирующих Bcl-2, как правило, выявлялась умеренная или высокая плотность микрососудов, что, по данным ряда авторов, ассоциируется с худшим прогнозом для пациентов. Анализируя полученные данные, можно отметить, что, по-видимому, Bcl-2-позитивные опухоли являются более агрессивными по своему биологическому потенциалу, поскольку в этих опухолях выявлялся высокий уровень маркера неоангиогенеза, причем в подавляющем большинстве эти опухоли несли PR. Вcl-2-позитивные опухоли в основном несли PR, однако в отношении ER картина была мозаичной и большинство опухолей не экспрессировали ER. Отсутствие ER в эндометриоидной аденокарциноме тела матки сопровождается нарастанием рецидивов с 12,7 % до 29 % и в целом связано с более неблагоприятным прогнозом. Таким образом, совокупность полученных результатов и данных литературы позволяет предположить более неблагоприятный прогноз у группы боль-
ных с экспрессией Bcl-2, умеренной и высокой плотностью микрососудов в опухоли, отсутствием ER.
Полученные результаты являются основой для дальнейших исследований, посвященных индивидуальному прогнозированию течения РЭ и выделению групп больных с неблагоприятным прогнозом, где наряду с клиническими параметрами: стадией про-
цесса и гистотипом опухоли должен определяться комплекс иммуногистохимических маркеров.
Т.А. Айвазян, Л.А. Александрова, И.М. Нестеров ГУ «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова»
